RAW264.7 细胞培养售后专项考核试卷

本试卷总分100分，包含单选、多选和判断选择题三种题型。请认真阅读题目，选择正确答案。

1. 基本信息：

一、单项选择题（共7题，每题仅有1个正确答案，每题4分，共28分）

2. RAW264.7 细胞传代唯一标准操作方式为

0.25% 胰酶常温消化 3min 后吹打传代细胞刮刀机械刮取法传代EDTA 单独解离后吹打传代反复高压吹打直接脱落细胞传代

3. RAW264.7 标准完全培养基血清添加比例为

5% FBS10% FBS15% FBS20% FBS

4. LPS 微量污染会造成 RAW264.7 哪种核心实验问题

细胞增殖速度大幅提升自发 M1 型极化，实验假阳性细胞完全丧失吞噬功能细胞永久无法贴壁

5. 细胞刚复苏时贴壁牢固、难以吹落的核心原因是

细胞存在质量缺陷复苏应激修复期，伪足大量伸展锚定瓶底培养基 pH 失衡CO₂培养箱浓度异常

6. RAW264.7 最佳传代汇合度区间为

30%-40%50%-60%70%-80%95%-100% 完全长满

7. M1 型巨噬细胞主要诱导剂是

IL-4、IL-13LPS、IFN-γIL-10、TGF-βVEGF、CCL22

8. 细胞大面积梭形极化、更换血清+拍打筛选仍无改善，正确处理方案

提高血清浓度继续培养多次胰酶消化去除极化细胞直接废弃，复苏 P3-P8 早代冻存细胞降低培养箱 CO₂浓度缓解应激

二、多项选择题（共5题，每题≥2个正确答案，多选、少选、错选均不得分，每题6分，共30分）

9. 胰酶消化 RAW264.7 会引发哪些不可逆危害

破坏细胞膜整合素、粘附分子诱导细胞非特异性自发极化细胞碎片大量产生，存活率暴跌稳定维持细胞原始表型与功能

10. 培养过程中导致 RAW264.7 自发极化的“微环境噪音”包含

血清中微量 LPS 内毒素污染细胞密度过高引发接触抑制长期不换液，乳酸、DAMPs 代谢物累积全程使用无内毒素级培养基、枪头

11. RAW264.7 细胞间介导极化扩散的通讯方式有

旁分泌细胞因子（TNF-α、IL-1β）NO 气体信号自由弥散传导外泌体携带 miRNA、蛋白调控周边细胞间隙连接直接传递 Ca²⁺、cAMP 信使

12. 判断 RAW264.7 细胞健康优良的形态特征包含

细胞圆形 / 椭圆形、轮廓饱满清晰贴壁紧实，无大量细长网状伪足胞质均匀，无大量异常空泡整体呈梭形、拉网状伸展

13. 标准化刮刀法传代关键操作要求有

提前更换 37℃预热新鲜完全培养基单方向匀速刮取，禁止来回反复刮擦大口径枪头轻柔吹打，全程避免气泡刮取后必须离心收集细胞再分瓶

三、判断选择题（共8题，每题4个选项，仅1项表述正确，选出正确答案，每题5.25分，共42分）

14. 下列关于 RAW264.7 细胞贴壁难易说法正确的是

细胞很难吹落说明细胞质量差、代次老旧复苏应激期细胞伪足伸展，贴壁会更加牢固容易吹落的细胞活性更高、实验重复性更好优质早期代次细胞贴壁松散，轻轻一吹即可脱落

15. 下列关于悬浮细胞处理说法正确的是

高密度培养产生的悬浮细胞均为死细胞，直接丢弃传代时仅收集瓶底贴壁细胞，悬浮细胞全部舍弃细胞密度升高自然脱落的悬浮细胞具备活性，需收集传代悬浮细胞只能丢弃，无法用于后续接种

16. 下列关于拍打筛选法说法正确的是

健康圆形细胞贴壁更紧实，拍打无法脱落极化梭形细胞贴壁松散，轻拍即可脱落收集利用贴壁差异，轻拍瓶壁脱落健康圆形细胞，富集正常细胞拍打筛选仅需操作 1 次，即可完全去除极化细胞

17. 下列关于胎牛血清使用说法正确的是

可随意更换不同批次血清，不影响极化实验不同批次血清内毒素、生长因子存在差异，需锁定单一优质批次RAW264.7 对血清浓度不敏感，5%-20% 均可正常培养频繁更换血清批次能降低细胞自发极化概率

18. 下列关于 M2 型巨噬细胞描述正确的是

由 LPS、IFN-γ 诱导，属于促炎型免疫细胞显微镜下呈梭形拉网状，主要负责抗炎与组织修复高分泌 TNF-α、IL-1β，具备强杀菌能力细胞形态圆润饱满，无细长伪足

19. 下列关于实验用水标准说法正确的是

普通蒸馏水即可配制细胞培养基，成本更低配制试剂全程需使用≥18.2 MΩ・cm 超纯水，减少 LPS 污染超纯水仅用于清洗器皿，培养基可用自来水配制内毒素污染与水质无关，无需管控用水标准

20. 下列关于长期传代细胞遗传漂变说法正确的是

长期连续传代不会改变细胞亚群特征，实验数据稳定遗传漂变后细胞基因表达不变，极化实验不受干扰建议长期使用 P3-P8 早代细胞，降低遗传漂变带来的误差传代次数越高，细胞群体均一性越好

21. 下列关于细胞传代汇合度说法正确的是

细胞长满 100% 再传代，收获细胞数量最多，实验效果最好汇合度 70%-80% 为最佳传代区间，避免接触抑制诱发自发极化低密度 30% 以下传代可防止细胞极化，是最优操作汇合度高低不会影响细胞极化、炎症因子分泌功能

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